Медицинский центр ранней диагностики
Диагностика, лечение, профилактика заболеваний

ИММУНОДИАГНОСТИКА.ру
 
 Home  FAQ   Поиск   Пользователи   Группы   Регистрация 
 Профиль   Войти и проверить личные сообщения   Вход 

Иммуноферментный анализ

 
       Список форумов Медицинский центр ранней диагностики -> Ранняя диагностика заболеваний
Предыдущая тема :: Следующая тема  
Автор Сообщение
А.Б.Полетаев
д.м.н., профессор


Зарегистрирован: 10.01.2007
Сообщения: 49
Откуда: МИЦ "Иммункулус"

Добавлено: Ср Янв 10, 2007 16:25    Заголовок сообщения: Иммуноферментный анализ

Общие принципы иммуноферментного анализа

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) был предложен в начале 70-х годов Engvall и Peаrlmann. В настоящее время ИФА является одним из наиболее часто используемых иммунохимических методов, широко применяемых как в научных исследованиях, так и в городских и районных медицинских учреждениях разного профиля в диагностических целях.


Сущность ИФА заключается в последовательном проведении следующих этапов:

1. Сорбции на твердую фазу антигена (например, в лунки полистиролового ИФА-планшета) для выявления антител к нему (либо в сорбции на твердую фазу антител для выявления специфического антигена).
2. Внесения в систему (в лунки планшата для ИФА) биопроб, в которых выявляются специфические антитела (или антигены).
3. Инкубации системы в течение определенного времени, в ходе которого происходит специфическое взаимодействие антитела и антигена на твердой фазе.
4. Внесения в систему раствора фермента (чаще всего пероксидазы), молекулы которого коньюгированы с антивидовыми антииммуноглобулинами (например, кроличьими или козьими антителами к IgG, IgM, IgA человека) и инкубации системы в течение определенного времени.
5. Внесения в систему раствора хромогенного субстрата, каталитически разлагающегося (превращаюсегося) под действием конъюгата фермента с антивидовыми антителами.
6. Образования окрашенного продукта, который выявляется визуально, либо фотометрически.

Существует ряд вариантов постановки ИФА, из которых наибольшее практическое значение получил гетерогенный твердофазный ИФА. Использование твердой фазы позволяет упростить процесс разделения компонентов реакции за счет иммобилизации одного из компонентов на твердой фазе и легкости удаления соединений, не участвующих в реакции с помощью простого отмывания. Основными требованиями, предъявляемыми к твердой фазе при проведении ИФА, являются высокая воспроизводимость количественных характериатик сорбции компонентов (антигены, антитела), используемых в реакции, и высокая специфическая емкость (т. е. способности сорбировать на своей поверхности антитела или антигены в количествах, необходимых для проведения реакции в сочетании с как можно меньшей неспецифической сорбцией белков из исследуемых образцов и коньюгатов). Наиболее распространенным способом иммобилизации антител или антигенов является физическая адсорбция, при которой соответствующие молекулы присоединяется к поверхности твердой фазы за счет ионных и гидрофобных взаимодействий и водородных связей. В качестве твердой фазы в большинстве коммерческих диагностических наборов используют полистироловые 96-ти луночные планшеты или полистироловые шарики. Широкое использование стандартной конфигурации 96-луночного планшета позволило унифицировать оборудование, необходимое для проведения иммуноферментного анализа.

Иммуноферментный анализ по сравнению с другими методами выявления антигенов и антител обладает следующими преимуществами:
• высокой чувствительностью (существуют варианты ИФА, позволяющие выявлять антитела или антигены в концентрации до нескольких пг/мл).
• возможностью использовать минимум исследуемого материала (например, для проведения всех анализов группы ЭЛИ-Тест будет достаточно 0,5 мл сыворотки обследуемого).
• стабильностью реагентов, используемых в работе
• возможностью автоматизации

Все эти достоинства определили широкое применение ИФА практически во всех областях современной медицины.
Вернуться к началу
Показать сообщения:   
       Список форумов Медицинский центр ранней диагностики -> Ранняя диагностика заболеваний Часовой пояс: GMT + 3
Страница 1 из 1

 
Перейти:  
Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете голосовать в опросах


Rambler's Top100

 Powered by phpBB © 2001, 2005 phpBB Group
Русская поддержка phpBB